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CD41诊断急性巨核细胞白血病假阳性原因探讨
来源:医疗点评网         添加时间:2017-02-11

急性巨核细胞白血病是一种临床少见类型白血病,形态学和免疫组化特异性较差,临床多由电镜检查血小板过氧化物酶确立诊断。随着流式细胞学技术的广泛开展,应用巨核细胞系或血小板相关单克隆抗体检测,代替电镜技术诊断急性巨核细胞白血病已逐渐成为常规,流式细胞学技术具有操作简单、快捷、可同时检测多个细胞参数和大量细胞的优点,但由于该技术无法正确区分是黏附的血小板还是真正的内源性血小板,临床存在大量假阳性现象。为进一步探讨原因和对策,我们通过密度梯度离心去除血小板并应用富含抗凝剂EDTA和介质的洗涤细胞,可以降低这种黏附反应,现将结果报告如下。

病例资料

1.一般资料:1994年1月~2004年1月我院初诊急性巨核细胞系白血病(AML)435例,均常规行细胞形态学、免疫表型、细胞遗传学检测(MIC)联合确诊,47例显示CD41抗原阳性表达,男29例,女18例;年龄1.2~72岁,中位年龄36岁。依据张之南标准诊断AML并参考有关文献诊断为急性巨核细胞白血病(M7)。

2.免疫表型分析:无菌采集患者骨髓液,应用EDTA抗凝,用淋巴细胞分层液(葡聚糖、泛影糖胺,比重1.077,购自天津川业生化制品公司)分离出单个核细胞(MNC),并用0.7mmol/L氯化氨(NH4CL)去除红细胞,采用间接免疫荧光法标记染色。CD41、CD15均购自中国医学科学院天津血液病研究所,加入一抗(CD41,SZ22,小鼠,单克隆抗体;CD15,80H5,小鼠,单克隆抗体)后置4℃冰箱30分钟,用含0.2%小牛血清磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次,加二抗(山羊抗小鼠IgG,多克隆),孵育20分钟后上机(Coulter XL型,美国)检测,每管至少检测10000个细胞。结果判断以CD41≥20%、CD15≥20%为阳性标准。

3.免疫组化染色:骨髓涂片自然干燥24小时,10%甲醛溶液、酒精固定液固定60秒,马血清封闭Fc段10分钟,然后再用3%过氧化氢浸泡10分钟(消除内源性过氧化物酶),加入CD41抗体湿盒密闭孵育60分钟,生物素化二抗30分钟,酶标亲和素测定20分钟,二氨基联苯胺(DAB)显色,苏木精复染,酒精脱水,二甲苯透明,中性树脂封固后镜下观察,CD41抗原存在部位呈现棕色反应。

4.统计学处理;应用SPSS 10.0软件完成,均数比较用t检验,率的比较用Fisher’s Exact Test检验,以P<0.05为有统计学意义。

结果

⑴CD41阳性AML患者的一般情况:对47例CD41阳性者根据MICM分型标准进行分类,其中M7(M7组)8例,假阳性39例(假阳性组),在诊断为M7的患者中通过免疫组化确诊5例,电镜检查确诊3例。在假阳性的39例中,有部分患者进行了染色体核型分析和基因检测,以确定诊断。临床若单纯依据免疫分型结果诊断M7,误诊率为82.98%(39/47),详见表1。

表1 CD41阳性的急性巨核细胞白血病47例一般情况

组 例数 中位年龄 性别 CD41(%) 血小板计数(×109/L) 男 女 M7组 8 36 4 4 50.52±23.56* 73.00±14.42 假阳性组 39 35 25 14 28.48±8.96 94.28±85.76

注:与假阳性组比较,*P<0.05

确诊为M7的与CD41假阳性的患者比较,性别、年龄均无显著差异,但M7患者的CD41阳性程度显著高于假阳性患者(P=0.000),虽然假阳性病例的血小板计数略高于M7病例,但统计学比较差异不显著。

⑵CD41阳性的AML患者CD15表达:8例M7中有7例初诊免疫表型检测了CD15,发现仅有2例(2/7)表达CD15,其中1例是慢性粒细胞白血病急性变患者;假阳性组39例,有34例初诊检测CD15,此34例中有29例CD15表达阳性,阳性率85.29%,两组比较差异显著(P=0.006)。

⑶CD41假阳性表达与白血病形态学亚型的关系:本文CD41假阳性的39例中,M2a8例,M2b2例,M3a1例,M3b2例,M4a1例,M4b5例,M5a1例,M5b19例。CD41阳性的AML见于除M6外的其他髓系白血病亚型,较多表达于M5、M4、M2,66.7%的患者为单核细胞白血病。

⑷CD41阳性与假阳性的AML直方图改变:CD41假阳性患者的直方图基底较窄,峰较高,峰形偏瘦;而CD41阳性患者的直方图基底较宽阔,峰扁平,形状较丰满。

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